Una técnica de PCR

 Técnica de PCR en la influenza (virus de la gripe)

Los virus de la influenza son virus de ARN, existen tres tipos (tipo A, B y C). El genoma viral segmentado está encerrado en una envoltura superficial que contiene lípidos y que tiene hemaglutinina (H) y neuraminidasa (N), dos antígenos de superficie principales. La confirmación de la influenza (virus de la gripe) se puede realizar mediante cultivo del virus, RT-PCR o anticuerpos neutralizantes específicos en la sangre a partir de hisopos nasofaríngeos/faríngeos o aspirados traqueales en pacientes intubados, preferiblemente dentro de los 4 a 5 días posteriores a la enfermedad. La prueba de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RT-PCR) sigue siendo la principal base de diagnóstico (1).

Imagen. Researchgate.net [Internet] [citado 15 junio 2024]. Disponible en: https://www.researchgate.net/figure/Figura-1-Flujograma-que-resume-los-pasos-de-la-tecnica-RT-PCR-1-Recoleccion-de-las_fig1_357357615

Tema: Diagnostico del virus de la gripe (Influenza)

Objetivo: Presentar la técnica de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RT-PCR) múltiple para la detección del virus de la gripe (influenza), lo que la convierte en un método indispensable en diversos campos de la biología molecular y la medicina

Tipo de muestra biológica: hisopado nasofaríngeo/orofaríngeo o aspirados

Tipo de ácido nucleico: ARN viral, su extracción se realizó usando el kit comercial QIAamp® Viral RNA mini kit (Qiagen) y se almacenó a -80 ºC hasta el procedimiento de RT-PCR múltiple

Gen o secuencia a amplificar: gen de la matriz del virus influenza A (1027 pb), gen de la nucleoproteína del virus influenza B (1565 pb) y el gen GAPDH de las células huésped (1200 a 1500 pb), gen de la hemaglutinina de los subtipos A (H1N1) pandémico (pdm09) con 13,600 pb y A (H3N2) con 13,588 pb

Tipo de PCR: RT-PCR múltiple en tiempo real.

Número de copias: El límite de detección viral fue del rango de 7 a 9 copias/µL por virus

Visualización: Para visualizar los resultados de una RT-PCR múltiple se utilizan: electroforesis en gel, microarrays y fluoróforos específicos (2).

Bibliografía

1.- Kumar V. Influencia en niños. Indian J Pediatr [Internet]. 2016 [citado 15 Jun 2024]; 84(2):139-143. Disponible en: https://link.springer.com/article/10.1007/s12098-016-2232-x

2.- Marcos P, Huaringa M et al. Detección de virus influenza A, B y subtipos A (H1N1) pdm09, A (H3N2) por múltiple RT-PCR en muestras clínicas. Rev. Perú. Med. [Internet]. 2017 [citado 17 de junio 2024]; vol.34 no.2. Disponible en: http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1726-46342017000200005