Producción de una lectina recombinante de frijol tépari (phaseolus acutifolius) con efecto citotóxico sobre células de cáncer de colon
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Tema: Producción
sintética de lectina recombinante de frijol Tépari con actividad citotóxica
sobre células de cáncer
Objetivos: Generar
un sistema de producción independiente del frijol, que constituya una
plataforma de obtención continua y permita implementar estrategias que
contribuyan a facilitar el proceso. Para ello, la secuencia codificante de una
de las lectinas presuntamente responsables del efecto biológico de la FCL fue
acoplada a una cola de hexahistidinas y fusionada en fase con el “factor-α” de
S. cereviscea. Este material genético se introdujo en la levadura Pichia
pastoris que, a su vez fue transferida a cultivo líquido bajo condiciones
controladas para favorecer la producción de la proteína. El rendimiento final
obtenido fue de 316 mg de lectina recombinante (LR)/L de medio de cultivo. La
elaboración de mutantes de la LR, se logró demostrar que la sustitución
conservativa de los residuos Arg132 y Arg103 deriva en una importante
disminución de su citotoxicidad sobre células de cáncer de colon (1).
G: Gen o secuencia a
clonar: Gen de la lectina (rTBL-1)
ER: Enzimas de
restricción: enzimas PstI y XbaI
EL: Enzima ligasa:
Ligasa
T4 de Fermentas
V: Vector: pGAPZαB
CR: Célula receptora: TOP10
de Escherichia coli-levadura Pichia pastoris
MTG: Mecanismo de
transferencia o inserción de gen: se procedió con la transformación de P.
pastoris mediante el uso del kit Pichia EasyCompTM Transformation Kit de la
casa comercial de Thermo Fisher Scientific
MIC: Métodos de identificación de clones: Cultivo-secuenciación- Escrutinio de clonas mediante PCR de colonia utilizando un juego de primers- electroforesis en gel de agarosa (1).
Ácidos Nucleicos recombinantes en la naturaleza
La invención se centra en ácidos nucleicos que contienen segmentos del virus de la gastroenteritis transmisible (TGEV) y secuencias que codifican al menos un fragmento inmunológico del virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRSV). Estos ácidos nucleicos han sido modificados para incluir un residuo que forma un puente disulfuro y para eliminar sitios de glicosilación que podrían interferir con la producción de anticuerpos.
Además de los ácidos nucleicos, la invención abarca vectores, células huésped y partículas virales que contienen estas secuencias. El objetivo principal es desarrollar composiciones farmacéuticas, especialmente vacunas, que puedan inducir una respuesta inmune más efectiva contra el PRRSV. Esto se logra combinando elementos genéticos de TGEV y PRRSV modificados para mejorar la capacidad de generar anticuerpos que puedan neutralizar el virus (2).
Bibliografía
1.- Martínez D. Producción de una lectina recombinante de frijol tépari (phaseolus acutifolius) con efecto citotóxico sobre células de cáncer de colon [Internet]. 2017 [citado el 21 de julio del 2024]. Disponible en: https://repositorio.cinvestav.mx/bitstream/handle/cinvestav/1634/SSIT0009788.pdf?sequence=1
2.- Gurpegui S, Sánchez E et al. Ácidos nucleicos que codifican para vacunas contra el virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRSV) [Internet]. 2011 [citado el 21 de julio del 2024]. Disponible en:https://digital.csic.es/handle/10261/40667
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No precisa el objetivo en medicina ni separa los métodos para identificar el gen /productos del gen, el ej de recombinación en la naturaleza debió ser sin manipulación humana 0.5/1
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